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小鼠原代星形膠質(zhì)細胞的特性及處理方法
小鼠原代星形膠質(zhì)細胞的特性及處理方法
更新時間:2022-01-21 | 點擊率:3774
小鼠原代星形膠質(zhì)細胞
是膠質(zhì)細胞中體積大的一種。用經(jīng)典的金屬浸鍍技術(shù)(銀染色)顯示此類膠質(zhì)細胞呈星形,從胞體發(fā)出許多長而分支的突起,伸展充填在神經(jīng)細胞的胞體及其突起之間,起支持和分隔神經(jīng)細胞的作用。
纖維性星形膠質(zhì)細胞多分布在腦脊髓的皮質(zhì),突起細長,分支較少,胞質(zhì)中含,多分布在灰質(zhì),細胞突起粗短,分支多。胞質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)絲較少,又稱苔狀細胞。電鏡下星形膠質(zhì)細胞的胞核有缺失,胞質(zhì)較清亮,游離核糖核蛋白體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均很少,糖原顆粒豐富,有大量的膠質(zhì)絲。纖維形星形膠質(zhì)細胞的突起呈長圓柱形,而原漿性星形膠質(zhì)細胞的突起呈薄片狀,并常包裹著神經(jīng)細胞及其突觸。星形膠質(zhì)細胞的腳板與血管內(nèi)皮細胞之間相隔一層基板,腳板質(zhì)膜與基板接觸處有半橋粒結(jié)構(gòu)。
小鼠原代星形膠質(zhì)細胞的特性:
1、組織來源于實驗動物的正常腦組織。
2、細胞鑒定:神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色法。
3、經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4、不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5、細胞生長方式:星狀細胞,貼壁培養(yǎng)。
細胞處理:
1、復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
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